保姆级攻略🔥B细胞体外激活步骤详解！

别人放假我学习 B细胞体外激活的两个信号 BCR在与抗原特异性结合后即启动B细胞活化的第一信号ITAM上的酪氨酸磷酸化。B细胞的第二活化信号又称共刺激信号，由Th细胞与B细胞表面多对共刺激分子相互作用产生，其中最重要的是CD40/CD40L B细胞体外激活实验步骤 （1）基质细胞的准备 10 cm细胞培养皿预先过夜接种表达CD154（CD40LLOW细胞系）的基质细胞，作为B细胞培养的滋养层细胞。 （2）B细胞接种 将B细胞接种至10 cm培养皿（6 mL /皿）的饲养层细胞上，调整B细胞密度为100/cm2。 （3）培养条件设置 R5培养基（含有5%人血清、55 µM 2-巯基乙醇、2 mM L-谷氨酰胺、100 U/mL青霉素、100 µg/mL链霉素、10 mM HEPES、1 mM丙酮酸钠和1%MEM非必需氨基酸），并补充重组人IL-2（50 ng/mL）、IL-4（10 ng/mL）、IL-21（10 ng/mL），和BAFF（10 ng/mL），连续培养B细胞8天，培养时间根据实验目的可进行改变。 （4）培养基更换 在第4天和第6天，弃去一半旧培养基（避免触碰底部细胞），并用预热的、含细胞因子的新鲜R5培养基等量替换。当培养时间超过8天时，须在第8天将B细胞转移至新的饲养层细胞上，同样在转移后的第4、6天等量替换培养基。细胞培养结束后，收集B细胞进行计数，并在液氮中冷冻保存待用。 以上内容来自细胞大师训练营